酶联免疫吸附试验检测血清抗体结核分枝杆菌抗体

【摘要】目的 探讨酶联免疫吸附试验在结核病临床诊断中的应用及临床意义。方法 用酶联免疫吸附试验（ELISA）技术检测105例肺结核患者血清抗结核抗体与痰直接涂片检测患者痰中的结核杆菌进行了对比。分析比较两者的检测结果。结果 ELISA法检测患者血清抗结核抗体阳性率为83.8%，直接涂片阳性率为26.3%，ELISA法的阳性率明显高于痰直接涂片（P<0.001）。结论 ELISA法检测患者血清抗结核抗体简便、快速、特异性好，是目前最理想的诊断方法。

【关键词】酶联免疫吸附试验（ELISA）；结核抗体；方法对比

酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清抗结核分枝杆菌抗体，为Nassau等（1976）率先应用于结核病的临床诊断。近年来，随着结核分枝杆菌几种特异性抗原的发现与纯化，实验技术的不断改进，ELISA检测血清抗体已在国内临床实验应用，并有多篇文献报道研究探讨了结核抗体的检测及其临床意义。研究证实活动性结核病患者细胞免疫减损，体液免疫亢进，血清及其他体液中结核抗体（主要是IgG）升高，应用ELISA法检测结核抗体有助于结核病的诊断和鉴别诊断。我们对105例确诊结核和60例健康组患者检测血清中的结核抗体与同步条件涂片抗酸染色法进行比较，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2000年1月～2006年10月对105例肺结核患者应用ELISA技术检测其血清中的抗结核抗体与痰直接涂片法检测患者痰中结核杆菌进行检测对比，诊断标准参考中华医学会结核病分会关于“肺结核病诊断与治疗指南”[1]确诊；在105例患者中，男66例，女39例，年龄20～79岁，平均年龄56岁。浸润型肺结核80例，慢性纤维空洞型肺结核25例。初治66例，复治39例。另选择临床诊断非结核病人60例作为对照，其中慢性支气管炎合并肺气肿者31例，支气管扩张症11例，肺炎6例，肺癌并咯血者12例。

1.2 仪器及试剂 酶联免疫吸附试验（ELISA）快速测定试剂盒由上海科华生物技术有限公司提供，参考说明书方法操作。应用上海科华ST-360型酶标仪检测。

1.3 标本来源 检测对象，血清标本由本院临床收治患者和细菌室提供，取早晨空腹血标本并及时检测。痰标本由病人早晨彻底清洁口腔后，深咳出1～2口痰液（如果咯血取脓血痰）留于加盖无菌容器内立即送检。

1.4 检测方法和结果判断 血清抗结核抗体（IgG）检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA），显色后应用上海科华ST-360型酶标仪检测。涂片以抗酸染色在镜检100个视野有3～9条抗酸杆菌为阳性，镜检300个视野未见抗酸杆菌为阴性。

2 结果

105例ELISA法检测血清TB-Ab阳性88例，阳性率为83.8%；直接痰涂片阳性28例，阳性率为26.3%，这28例ELISA法检测其血清全部阳性，ELISA的阳性率明显高于直接涂片法（P<0.001）。涂片阴性77例中ELISA检测血清TB-Ab阳性60例。60例非肺结核疾病患者中ELISA检测阳性6例（肺癌2例，慢性支气管炎2例，支气管扩张1例）；涂片未检测阳性者。TB-Ab阳性治疗3～6个月后复检血清结核抗体患者50例。ELISA复查阳性40例，阳性率80.0%；涂片复查20例，阳性2例，阳性率10.4%。3 讨论

由于结核病诊断缺乏“金标准”，确诊只有通过临床标本培养出结核分枝杆菌或正规抗结核治疗有效来确定。因而往往无法早期明确诊断。我们应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测临床诊断为肺结核患者血清抗结核分枝杆菌抗体，阳性率为83.8%（88/105），涂片阳性率为26.3%（28/105），两者差异有非常显著性（P<0.001）；在痰涂阳性病人中（ELISA）法检测全部阳性；在痰涂阴性病人中，（ELISA）法检出阳性率为78%（60/77）。文献报道（ELISA）法检测肺结核患者血清中的抗结核抗体阳性率明显高于痰涂片和培养，尤其在结核早期感染时细菌量少或化疗后细菌变异死亡难于培养时更明显。因此，ELISA特别适合结核病的早期诊断和鉴别诊断[3]。（ELISA）检测血清中的抗结核抗体不受细菌活力和形态的影响，只要细菌DNA尚未变性，可检出痰液中死亡和是非正常形态的抗结核抗体，给结核病人化疗后结核杆菌检测和判断疗效提供了简便方法。实验结果表明该实验方法基本达到了快速（40min）、敏感、特异，简便（可目测判断实验结果）的实验要求。

本组病人经过正规的抗结核治疗3～6个月后，临床症状和胸片显示均有明显好转，但ELISA复检阳性率仍为80.0%（40/50），与程绍基等[4]报道26例活动性肺结核治疗6个月后检测阳性率为88.0%（22/25）的观点趋向一致。抗结核治疗后经ELISA试验法仍为阳性的持续时间及其临床意义尚不清楚，但说明ELISA检测结核病患者还不能鉴别是否近期感染或既往感染还是隐性感染，尚不能作为疗效考核的依据。

本组在肺癌、慢性支气管炎，支气管扩张等肺结核病人中ELISA法检出假阳性6例，假阳率为10%。考虑可能是肿瘤组织坏死时将隐性病灶中结核菌释放后呈TB-DNA阳性或可能是以上患者有慢性肺部疾病，造成局部免疫力低下等，使隐性感染或临床上认为已稳定的病灶中的结核菌有机会复燃而呈ELISA-TB-DNA阳性[2]另外由于ELISA具有很高灵敏度，因而在技术操作中易造成污染而呈假阳性[4]。提示通过抗结核抗体的检测可以减少痰涂片阴性患者的漏诊及误诊，具有一定的早期辅助诊断价值。对肺外结核也具有辅助诊断意义。

【参考文献】

1 中华医学会结核病分会. 肺结核病诊断与治疗指南. 中华结核和呼吸杂志，2001，24（3）：70.

2 张斌，谭驹，谭守勇,等. ELISA用于痰涂片阳性结核病早期诊断的评介.中华结核和呼吸杂志，1998，21（1）：60.

3 程绍基，潘鳘萱.酶联免疫吸附试验在肺结核及矽肺结核诊断中应用研究.中华结核和呼吸杂志，1993，16（4）：221.

4 潘鳘萱.ELISA在结核病临床诊断中的应用及存在问题.中华结核和呼吸杂志，1995，18（4）：197-198.

作者单位：214194 江苏无锡，无锡市锡山区锡北人民医院