血小板二磷酸腺苷受体研究的进展

血小板聚集在止血与血栓形成中具有关键的作用，多种物质都可以通过各自特异性受体引起血小板的活化与聚集。目前已发现了四十多种血小板受体，其中绝大多数的性质与结构都已阐明[1]。二磷酸腺苷(ADP)是人们发现最早、也是体内最重要的诱导血小板聚集的物质。在体外实验中可观察到ADP诱导的两种血小板聚集类型。低剂量ADP引起较弱的、可逆性聚集，不伴有释放反应；高剂量ADP引起较强的、不可逆性聚集，同时有颗粒成分的释放。由于ADP易被磷酸酶破坏，目前还缺乏特异的ADP受体的配体及抗ADP受体单克隆抗体，血小板表面ADP受体数量较少以及血小板是无核细胞等原因，在技术上很难研究ADP受体的特性，人血小板ADP受体一直未能鉴定或纯化。近年来由于配体-受体研究的开展，临床上先天性血小板ADP受体缺陷性疾病的发现，抗血小板ADP受体药物的应用，以及分子生物学的进步，血小板ADP受体的性质、功能与结构已基本阐明，这已成为当前病理生理、血栓与止血以及药理学研究的一个重要进展。

1 血小板ADP配体-受体的研究 ADP受体属嘌呤类受体（P2受体），在机体广泛存在，参与调节血小板聚集、血管张力、心脏收缩、中枢与外周神经传导以及细胞分裂等多种生理病理反应。多数嘌呤类受体的基因已克隆，分子结构已基本阐明。嘌呤类受体按结构可分为P2X与P2Y两种类型，目前已发现了7种P2X的亚型与11种P2Y的亚型[2]。人们已合成了数十种腺嘌呤核苷酸类似物，由于分子中取代的基团及其结构的不同，它们对血小板ADP受体的结合特性与能力也不同。一部分表现为受体激动剂，而另一部分表现为受体拮抗剂，主要作用于P2X嘌呤受体。用33P标记的2-MeS-ADP测定，每个血小板表面有600个高亲和性结合位点（kd=5nmol/L）[3]。2-MeS-ADP具有剌激ADP受体的作用。其诱导血小板聚集的能力比ADP强5倍，特别是对活化的腺苷酸环化酶的抑制能力要比ADP强200倍。αβ-亚甲基-5-三磷酸腺苷也是P2X受体激动剂，但不引起血小板变形。另一方面，ADP的异构物2，5-二磷酸腺苷（A2P5P）及3，5-二磷酸腺苷（A3P5P）是P2Y1受体的抑制剂，能抑制ADP诱导的血小板变形和聚集，抑制细胞内Ca2+移动，但不影响ADP对腺苷酸环化酶的抑制。其它P2Y1受体抑制剂ATP与其人工合成的类似物Sp-ATPαS以及一种ADP衍生物ARL66096也抑制ADP诱导的血小板聚集，抑制细胞内钙流，同时有激活腺苷酸环化酶的作用。这些配体已成为血小板ADP受体研究的有用工具。

2 血小板ADP受体缺陷性疾病 1992年Cattaneo等[4]首先报道一例先天性血小板功能异常的患者。其主要表现为ADP虽可引起血小板变形，但不能诱导血小板聚集与释放，不能促进125I标记的纤维蛋白原或von willebrand因子结合于血小板表面，不能增高细胞内Ca2+浓度，也不能抑制前列腺素E1引起的cAMP的升高。而患者血小板对高浓度的胶原或凝血酶的反应正常。此外，凝血酶或蝰蛇毒加肾上腺素可引起正常的血块退缩，但蝰蛇毒加ADP不能使血块退缩。[3H]2-ADP与甲醛固定的血小板的结合减少。这些特点都表明患者血小板的ADP受体缺陷。以后Nurden等[5]也报道一例先天性出血患者。ADP可引起血小板变形，但不引起聚集；纤维蛋白原结合减少；不抑制腺苷酸环化酶活性。同时，[3H]2-MeS-ADP在血小板膜上的结合位点数减少95%以上。一些新的病例或家系正陆续被发现，提示本病并非罕见。患者的父母多为近亲婚配，表明为常染色体隐性遗传的特点。

3 抗血小板ADP受体药物 噻恩并吡啶（thienopyridine）类药物主要包括噻氯匹定及其类似物clopidogrel。这类药物除对各种诱导剂引起的血小板聚集都有一定的抑制作用外，而对ADP诱导的血小板聚集有完全与特异的抑制效果，能取消ADP诱导的一相聚集，这一点与阿司匹林及其它抗血小板药物显著不同。噻氯匹定类药物能明显延长出血时间，阻断血小板纤维蛋白原受体的利用性，降低由前列腺素E1升高的细胞cAMP水平，但不能阻断Ca2+经血小板膜通道的内流。长期以来，人们对噻氯匹定类药物的作用机制一直未能了解。近年来人们在大鼠实验中发现，噻氯匹定类药物使[33P]2-MeS-ADP与血小板的结合数量减少70%。这种抑制是非竞争性的，进一步增加药物的剂量也不能取消另外30%受体与配体的结合。这些结果表明，在血小板表面可能存在着两类ADP受体。一类受体与血小板变形以及Ca2+离子通道有关。另一类受体与G蛋白（主要是Gi蛋白）偶联，影响细胞内信息传递，从而降低了细胞内cAMP水平，促进致密管道系统Ca2+流入胞浆与GPⅡb-Ⅲa复合物纤维蛋白原受体的暴露，并最终导致了血小板聚集。噻氯匹定类药物主要是通过抑制第二类ADP受体发挥抗血小板作用[6]。噻氯匹定类药物并不是血小板ADP受体拮抗剂，也不能抑制ADP受体的合成，可能是通过干扰ADP受体的功能发挥了抗血小板作用。

应该指出，噻氯匹定类药物对血小板两种ADP受体的药理作用与上述嘌呤受体拮抗剂的作用并不完全相同。噻氯匹定类药物与P2Y1受体抑制剂（如A2P5P和A3P5P）都分别对[33P]2-MeS-ADP与血小板ADP受体的结合有部分的抑制作用，只有在这两类药物共同作用时才能出现完全的抑制效果[7]。这种差异的机制有待进一步阐明。