酶联免疫吸附试验中的假性结果分析

酶联免疫吸附试验（ELISA试验）是医学检验的免疫学检验方法之一，已经广泛应用到对病原微生物的免疫学检查试验中。用ELISA法检测乙肝病毒感染者的血清标志物（两对半）是目前最常用的实验室检验方法。和任何实验室检查方法一样，ELISA存在少量的假性结果（假阳性、假阴性），对临床诊断和治疗会有一定的影响。由于ELISA反应所测对象可以是抗原也可以是抗体，显色反应对结果的阴性和阳性也有两种不同的判断，所以这里以显色为阳性的模式为例归纳其影响因素如下。

1 假阴性时可能是下列因素的影响

(1)试剂在生产线上，发生少见的“漏包”，或包被的抗原或抗体失活或活性不足。

(2)试剂的运输、保管不当。如：运输过程中温度过高、保存试剂的环境不好，导致试剂中的标记物活性降低，或者中和试剂完全失活。

(3)操作过程中的误差，加样中出现错、少、漏的现象；加显色剂速度慢，观察时间迟，使褪色反应快的出现假的阴性；洗涤过程中，用力过猛、浸泡时间太长、反复洗涤次数太多，使反应产生的免疫复合物丢失。

(4)忽略临界值血清的作用，在试验中只做阳性对照，从而失去临界点的控制，造成假阴性。

(5)判读结果或登记、发报告时错位，出现错报的假阴性结果。

2 假阳性时可能是下列因素的影响

(1)操作的影响。超过规定量的加样量，使临界点附近的阴性成为假的阳性；洗涤过程中有溢出现象，使强阳性孔的反应液污染附近的阴性孔而出现假的阳性；洗涤时间或次数不够，使反应试剂残留，出现假的阳性；使用污染的加样吸头或反应孔；反复使用的底物液被污染或受到强光照射时间长，也会出现假的阳性。

(2)患者自身的免疫情况特殊。有自身免疫疾病的患者血清中，其IgG抗体等特殊成分会在ELISA反应过程中有一定的吸附作用，发生假的显色反应而出现假阳性。

(3)血清标本的影响。如冰冻标本的反复冻融、标本存放时间太长而长菌、标本溶血、高血脂的标本等等，均易出现假的阳性结果。

(4)酶标仪使用的影响。酶标仪是ELISA试验反应结果所必要的仪器，但在使用过程中也要注意一个特殊情况。由于酶标仪是对反应孔进行垂直比色，当反应板底部有污物时，很容易出现假的吸光度高值，导致假的阳性结果的出现。

(5)判读结果或登记、发报告时错位，出现错报的假阳性结果。

作者单位： 443500 湖北长阳，长阳土家族自治县人民医院检验科

(编辑：齐 永)